Анализы крови на сифилис: РИФ, ИФА, РВ, РИБТ, РПГА тест, ПЦР, расшифровка

Анализ ИФА на сифилис

ИФА — иммуноферментный анализ — является одним из самых прогрессивных методов диагностики сифилиса. Он выявляет признаки присутствия возбудителя заболевания на разных стадиях последнего. В основе анализа лежит выявление специфических антител, которые появляются в крови больного при внедрении в организм бледной трепонемы (бактериального возбудителя).

Метод ИФА работает не только для группы заболеваний, передающихся половым путем. В равной степени он применим и для диагностики самых разных болезней инфекционного характера. Принцип проведения анализа был разработан еще в 60-х годах прошлого столетия. Однако активно использоваться он начал только спустя 20 лет.

Сейчас ИФА применяется для диагностики сифилиса, СПИДа, туберкулеза и многих других болезней. Для обнаружения антител используются специально разработанные ферменты, активно реагирующие на специфические белки крови.

В каких случаях назначают ИФА?

Больной может сам прийти в клинику для проведения анализа, если у него присутствуют подозрительные симптомы (характерные высыпания на теле, повышенная температура, боли в мышцах и пр.). Однако на определенных стадиях недуг не проявляется столь явно. Через несколько недель после инфицирования симптомы исчезают, и пациент может ошибочно считать себя выздоровевшим. По этой причине существует ряд случаев, когда анализ ИФА проводится в обязательном порядке:

  1. При устройстве на работу на предприятия, где есть контакт с большим количеством людей, продуктами питания, детскими и медицинскими товарами.
  2. При постановке на учет беременной. Болезнь передается от больной матери младенцу, поэтому важно ее вовремя выявить.
  3. При донорстве крови. Перед тем как сдавать кровь, донор обязан проверить ее на наличие опасных инфекций, в том числе и сифилиса.
  4. Во время подготовки к операции. Проведение такого рода вмешательств подразумевает прямой контакт с кровью больного. Это может быть небезопасно для медперсонала и других пациентов клиники.
  5. При обнаружении симптомов у одного из половых партнеров. В этом случае второй партнер также обязан сдать кровь на пробу.
  6. При прохождении воинской службы, а также в случае тюремного заключения. Обе ситуации предполагают продолжительный контакт с большим количеством людей. Поскольку недуг передается не только половым, но и контактно-бытовым путем, любой человек из окружения инфицированного находится под угрозой.

Как проводится?

Главная особенность ИФА — высокая точность данных. Позволяет не просто обнаружить антитела, но и определить их количественное соотношение.

Это значит, что иммуноферментный анализ позволяет с 99,99%-ной вероятностью выявить болезнь и одновременно определить, на какой стадии развития болезнь в данный момент находится.

При проведении ИФА у пациента берут кровь из вены. Затем ее особым образом подготавливают и размещают на полистироловой панели со множеством лунок. При диагностике в сыворотку крови добавляют специальные ферменты, которые при наличии антител/антигенов недуга образуют с ними прочные соединения.

Результатом образования таких соединений становится изменение цвета плазмы крови в лунке (с бесцветного — на ярко-желтый). Работнику лаборатории достаточно визуально оценить результат, чтобы понять, что на панели — кровь больного.

Трактовка результатов

При ИФА на сифилис оценивают наличие 3 классов антител (иммуноглобулинов): A, M и G. Эти вещества образуются в крови инфицированного человека в строго определенной последовательности:

  1. Наличие иммуноглобулина A указывает на то, что с момента заражения бледной трепонемой прошло больше месяца.
  2. Антитела M выявляются при длительном присутствии инфекции в организме. Также они могут быть реакцией на обострение хронической болезни.
  3. Иммуноглобулин G организм вырабатывает на самом пике заболевания, а также после уже проведенного лечения.

Интенсивность окрашивания плазмы крови в ярко-желтый цвет при проведении ИФА напрямую указывает на количество антител. Если цвет плазмы слегка желтоватый, результаты ставят под сомнение и процедуру повторяют. При отрицательном результате цвет плазмы не меняется и остается прозрачным.

Ложноположительный результат ИФА

На протяжении всей жизни человеку довольно часто приходится делать ИФА на сифилис (перед устройством на работу и пр.). Положительный результат всегда становится стрессом. Однако не стоит паниковать раньше времени! Иногда ИФА может дать ложноположительный результат. В этом случае есть смысл провести повторное обследование.

Специалисты не советуют беспокоиться после первого же положительного результата ИФА, поскольку это исследование направлено на выявление не самой бледной трепонемы, а антител, которые организм вырабатывает в ответ на атаку патогенных бактерий. ИФА — анализ с высокой точностью (вероятность погрешности меньше 1%). При наличии сомнений врачи не ставят диагноз сразу же, а предлагают пациенту сдать кровь еще раз.

Ложноположительный ответ ИФА возможен при болезнях:

  • соединительной ткани, суставов (васкулит, ревматоидный артрит и пр.);
  • сердца (главным образом это касается воспалительных заболеваний: миокардита, эндокардита);
  • эндокринной системы (диабет);
  • инфекционных (гепатит, туберкулез и пр.).

Ложноположительный результат может быть при беременности или в том случае, если незадолго до ИФА пациенту была проведена вакцинация. Изменить итоги анализа не в лучшую сторону способно и употребление алкоголя, наркотиков.

В достаточно большом количестве случаев положительную реакцию дает проверка крови пациентов, которые уже прошли лечение. У 10% излеченных положительная реакция остается на всю жизнь, поскольку в крови постоянно циркулирует определенное количество антител как иммунный ответ на возникшее однажды заболевание.

Ложноотрицательный результат

Наряду с ложноположительным возможна и ложноотрицательная реакция. В самом начале болезни, когда трепонема только попала в организм, антитела вырабатываются в недостаточном для выявления количестве. Ферменты могут их не зафиксировать, поэтому итоги ИФА оказываются отрицательными.

При наличии подозрений на сифилис (пациент имел незащищенный половой акт, тем или иным образом контактировал с возможными больными и пр.) проводится повторный анализ.

Обследование контактных лиц

Существует определенный протокол действий на тот случай, если у пациента со 100%-ной достоверностью был выявлен недуг. В первую очередь обследование проходит его половой партнер: муж, жена, другие лица, вступавшие с зараженным в интимную связь. В этом плане медики категоричны. Обследование сексуальных партнеров является обязательным во избежание распространения опасного заболевания.

Лечение проходят все члены семьи больного, даже если их анализы показали отрицательный результат. Помним: сифилис — острозаразная болезнь, передающаяся контактно-бытовым путем. Дети и другие члены семьи могут получить трепонему во время пользования санузлом, общими полотенцами, посудой.

Действия после подтверждения диагноза

Как только данные ИФА на сифилис подтвердились, инфицированный и контактировавшие с ним лица проходят терапию антибиотиками. Все рекомендации врача — дозировку, периодичность приема лекарств — необходимо соблюдать в точности!

На время лечения работающим гражданам выдается справка с зашифрованным согласно МКБ-10 диагнозом. После полного излечения медицинская книжка продлевается. Выздоровевший работник может приступать к своим непосредственным обязанностям. Работодатель не вправе отказать ему в восстановлении на рабочем месте.

Таковы основные данные по проведению ИФА. Заразившимся нужно помнить: постановка диагноза не ставит крест на всей последующей жизни больного. Сейчас существуют эффективные препараты, позволяющие надежно излечивать это заболевание. Вовремя проведенные обследование и лечение позволяют избежать самых опасных последствий недуга и защитить от него других членов общества.

Диагностика сифилиса: анализы и их расшифровка

Сифилис – инфекционное венерическое заболевание, вызываемое спирохетами бледной трепонемы. Пути передачи: при сексе, от матери к плоду, трансфузионно, и значительно реже — через раны на коже, которые вступают в контакт с инфекционными поражениями. В зависимости от стадии, выделяют первичный, вторичный, латентный и третичный сифилис.

Прямые способы

Микроскопия в темном поле

Бледные трепонемы не могут расти на питательных средах и не визуализируются под световым микроскопом. Так как обнаружение патогена с помощью обычной микроскопии невозможно, применяют специальный микроскоп с темным полем, где возбудитель виден в виде спирали на темном фоне.

Для проведения микроскопии забирается биоматериал с подозрительного на заболевание очага. Микроскопия в темном поле – это возможный способ оценки кожных поражений, таких как шанкр первичного сифилиса или кондилома вторичного сифилиса. Если материал макулопапулезного очага сухой, исследуют аспират лимфатического узла.

Отрицательный результат не исключает патологический процесс, статистически выявление возбудителя возможно только в 80%.

ПЦР-диагностика

Реакция, направленная на многократное увеличение ДНК бледной трепонемы, позволяет сделать вывод об инфицировании сифилисом или об его отсутствии.

Биоматериал для анализа может быть любым: кровь, содержимое сифилида, спинномозговой жидкости и пр. Тест подходит для инкубационного периода.

ПЦР полностью специфична.

Непрямые серологические анализы на сифилис: трепонемные и нетрепонемные тесты

Серологические анализы (КСР или комплекс серологических реакций) считаются наиболее распространенным способом для диагностики всех стадий сифилиса. Выделяют следующие реакции:

  • агглютинации;
  • преципитации;
  • иммунофлюоресценции;
  • иммуноферментный анализ и пр.

Также серологические анализы на сифилис подразделяют на трепонемные и нетрепонемные.

Нетрепонемные

При подозрении на приобретенный сифилис выполняют скрининговое тестирование, для чего используют нетрепонемные тесты, определяющие антитела к липоидным антигенам тканей хозяина или возбудителя в разнообразных модификациях. В РФ рутинно выполняют реакцию микропреципитации (РМП), которая позволяет выявить антитела к поврежденным патогеном клеткам в крови. Достоверность скрининга высокая, но специфичность невелика, поэтому тестирование подходит для первичного массового обследования в превентивных целях.

Чувствительность экспресс-тестов оценивается в 78-86% для выявления первичного сифилиса, 100% для вторичного сифилиса и 95-98% для выявления третичного сифилиса.

Специфичность — от 85-99%, иногда- менее, что встречается при следующих состояниях:

  • гестация;
  • менструация;
  • онкология;
  • заболевания соединительной ткани;
  • туберкулез;
  • малярия;
  • вирусные заболевания;
  • болезни печени;
  • вакцинация;
  • «свежий» ИМ;
  • сыпной тиф и пр.

Помимо этого, избыток жиров в рационе, употребление спиртосодержащих напитков и прием некоторых лекарств могут привести к ложноложительным заключениям.

Результаты скринингового тестирования становятся положительными через 1-2 недели после образования шанкра. Нетрепонемные тесты дают отрицательный ответ через некоторое время после лечения. При ВИЧ-статусе нетрепонемные антитела могут выявляться длительно, иногда на протяжении всей жизни (что подтверждается результатами соответствующего рандомизированнного исследования).

Другие разновидности нетрепонемных анализов: VDRL, плазмореагиновый тест (RPR) , проба с толуидиновым красным, реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (РСКк).

Реакция Вассермана (RW)

Связывание комплемента – ответ иммунной системы на инфицирование, результат варьируется от отрицательного (ставится «-»), до резко положительного «++++» или 4 плюса.

В начальной стадии первичного сифилиса RW отрицательна.

Трепонемные

Из-за возможности ложноположительных результатов для подтверждения любого положительного или сомнительного результата нетрепонемного анализа, используют трепонемные тесты:

  • реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
  • гемагглютинация (РПГА),
  • иммуноферментный анализ (ИФА) для иммуноглобулинов класса G (IgG) и иммуноглобулина М (IgM);
  • иммуноблоттинг;
  • РИБТ/РИТ (реакция иммобилизации бледных трепонем).

Трепонемные тесты не используются для оценки эффективности терапии.

РИФ на определение трепонемных АТ класса IgG применяют после положительного результата экспресс-анализов (чувствительность 84% для первичного сифилиса и 100 % при других стадиях, специфичность 96%). Для диагностики врожденного сифилиса у новорожденных не применимы.

В некоторых лабораториях используют «обратные» скрининговые исследования.

CDC (Centers for Disease Control and Prevention, США) рекомендует традиционные исследования, с проверкой количественными нетрепонемными тестами, при положительном результате проводится лечение.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

На собранный материал наносят сыворотку с мечеными флюорохромом антителами, специфичными к антигену бледной трепонемы, возбудитель притягивает к себе иммунные комплексы, из-за чего начинает светиться в люминесцентном микроскопе.

Реакция пассивной гемоагглютинации или РПГА

До появления гемагглютинации (склеивания) эритроцитов с момента внедрения бледной трепонемы должно пройти не менее 4 недель.

Подготовленные эритроциты с фиксированными белковыми фракциями патогена взаимодействуют с плазмой, если есть антитела к сифилису, происходит реакция.

Подходит для подтверждения любой стадии заболевания.

Иммуноферментный анализ

В основу положена реакция антиген-антитело. Выявляются антитела различных классов, которые можно оценить количественно.

Полученные результаты позволяют судить о длительности патологического процесса, успешности проводимого лечения, иммунологическом статусе, активности возбудителей.

Иммуноблоттинг – разновидность ИФА, применяют для углубленной диагностики при всех сомнительных результатах.

Чувствительность и специфичность близка к 100%, на сегодняшний день ультрачувствительный метод идентификации белков.

Способ основан на реакции антиген-антитело. Антигеном служат бледные трепонемы, культивируемые в тестикулах кролика. При взаимодействии с антителами зараженного человека, патогены утрачивают подвижность. Реакция оценивается с помощью микроскопии в темном поле.

РИБТ в настоящее время применяют из-за трудоемкости реже, но анализ может быть полезен для решения спорных вопросов (ложноположительные реакции на сифилис).

Дифференциальная диагностика

Наибольшую сложность представляет диагностика третичного сифилиса, что обуславливается симптомами со стороны сердечно-сосудистой и нервной системы, а также проявлениями со стороны кожного покрова.

Перечислим заболевания, с которыми проводят дифференциальную диагностику при сифилисе:

С чего начинается диагностика сифилиса

Изначально проводится беседа с пациентом, во время которой уточняются детали: когда был подозрительный половой контакт и какие есть жалобы.

После сбора анамнеза переходят к физикальному осмотру, особое внимание уделяется области гениталий и ануса, слизистым оболочкам и лимфатическим узлам. Предварительный диагноз уже может быть установлен. Окончательная верификация происходит с помощью лабораторных анализов.

Читайте также:  9 главных правил английского этикета, чтобы быть таким же стильным, как агент из «Кингсман»

Если сказать просто о сложном, то одни анализы выявляют возбудителя сифилиса, а другие отражают реакцию организма на внедрение бледной трепонемы.

Для установки окончательного диагноза РПГА следует дополнить 1 трепонемным и 1 нетрепонемным анализом.

Диагностика сифилиса у беременных

Проводятся обязательное исследование на сифилис несколько раз в течение беременности.

Направление на анализ КСР выдается во время первого визита женщины в консультацию, и за время беременности трижды выполняется обследование. Пациентки из высокой группы риска с отягощенным анамнезом: ИППП, асоциальные, зависимые и пр. требуют особенно пристального внимания.

Если результаты анализа положительные, проводят более глубокую диагностику, и по показаниям назначают лечение, которое зависит от стадии и клинических проявлений.

Диагностика врожденного сифилиса

Большинство детей с врожденным сифилисом рождаются у нелеченных матерей, либо получивших терапию слишком поздно.

Трепонемные тесты с использованием неонатальной сыворотки не рекомендуются из-за пассивного переноса антител IgG. Все дети, рожденные от матерей с сифилисом, должны обследоваться с помощью количественного нетрепонемного серологического теста (RPR или VDRL), выполненного с использованием сыворотки крови новорожденного.

Как трактовать результаты серологических исследований

Реакция микропреципитации, РИФ и РПГА отрицательны – норма, положительны – подтверждение сифилиса.

Реакция микропреципитации отрицательна, остальные положительны – сифилис в анамнезе после проведения специфической терапии, либо поздняя стадия.

Отрицательная РИФ при положительных РПГА и реакции микропреципитации – результат вызывает сомнения, повторная комплексная оценка.

Отрицательный результат РИФ и микропреципитации, но положительная РПГА – состояние после успешной антибиотикотерапии либо ложноположительный результат.

Положительная РИФ при отрицательных РПГА и реакции микропреципитации – ранняя стадия, проведенное лечение или недостоверность результата.

Положительная реакция микропреципитации, не подтвержденная ни РПГА, ни РИФ – отсутствие сифилиса.

Инструментальное исследование при сифилисе

Инструментальная диагностика проводится в зависимости от вовлеченности органов. Например, гранулематозное поражение печени можно увидеть при компьютерной томографии брюшной полости.

Рентгенография органов грудной клетки у пациентов с третичным сифилисом может показать дилатацию аорты. Линейная кальцификация по ходу аорты свидетельствует в пользу сифилитического аортита.

Ангиография может быть полезна в диагностике абдоминальной сифилитической аневризмы.

При диагностике нейросифилиса при соответствующих симптомах используют люмбальную пункцию с забором спинномозговой жидкости.

Мишина Виктория, уролог, медицинский обозреватель

19,042 просмотров всего, 10 просмотров сегодня

Расшифровка результата анализов на сифилис

Расшифровка анализа на сифилис не представляет сложностей для пациента, если врачом было назначено исследование крови на инфекцию с помощью неспецифических тестов. Результаты, полученные с применением иммуноферментных реакций, обычному человеку интерпретировать затруднительно, и поставить правильный диагноз способен только врач.

Какие анализы используются в диагностике сифилиса?

Выявить наличие патогенного возбудителя сифилиса помогают серологические тесты:

    Реакция Вассермана (RW). Основана на связывании комплемента с комплексом антиген-антитело. Для идентификации применяется гемолитическая система. Повышению чувствительности пробы способствует кардиолипиновый антиген. Если значение положительно, на бланке с направлением ставятся кресты. Исследования крови с применением реакции Вассермана в некоторых случаях дают ложное показание.

Если венеролог подозревает наличие у пациента трепонемной инфекции при получении положительного анализа, назначается диагностика с применением других методов.

Как расшифровать результат неспецифического обследования

Расшифровка анализа на сифилис, проведенного с помощью неспецифических тестов, может содержать:

  • четыре креста (++++), означающих резко положительную пробу;
  • три креста (+++) – положительная реакция;
  • два креста (++) – слабоположительная проба;
  • один крест (+) – отрицательный или сомнительный результат;
  • обозначение знаком минус (-) – заболевания нет.

Как понять результаты специфического исследования

При использовании реакции иммуноферментации (ИФА) в крови пациента определяются иммуноглобулины (обозначения IgM, IgA, IgG):

  1. При выявлении IgA можно говорить о недавнем инфицировании, произошедшем около двух недель назад.
  2. Обнаружение иммуноглобулинов класса A и M позволяет определить первую стадию заболевания и окончание инкубационного периода.
  3. Получение сразу трех видов антител класса А, М, G указывает на прогрессирование сифилиса и борьбу организма с инфекцией.
  4. При выявлении IgG имеет смысл говорить об излечении сифилиса и правильно проведенной терапии.

Результаты тестов могут выражаться в процентах:

  • 20% – отрицательно;
  • 20-30% – сомнительный;
  • 30-50% – слабоположительный;
  • более 50% – положительный анализ.

Не всем людям, получившим результаты исследования удается расшифровать числа, представленные в виде отношения. Если в бланке указаны значения 1:2 — 1:800, говорить об инфицировании рано.

У части пациентов, прошедших курс терапии, антитела обнаруживаются в течение длительного периода.

При их росте врач подозревает наличие в организме пациента патогенного возбудителя. Титры снижаются при правильном лечении.

Достоверность анализов

Не всегда лабораторные исследования крови показывают правильный результат. Факторами, влияющими на достоверность результатов, являются беременность, хронические заболевания и аутоиммунные процессы. Показания тестов могут стать ложноположительными при приеме пациентом лекарственных препаратов.

Обнаружить наличие сифилиса могут исследования, проведенные с применением реакции Вассермана. К положительным результатам приводят вирусные заболевания (пневмония, туберкулез, малярия), нарушение работы печени, кроветворной системы. В этом случае врач выдает направление на ИФА, РПР.

Анализ РМП выдает ложноположительные значения при ревматоидных процессах, циррозе печени, онкологических заболеваниях, бруцеллезе, мононуклеозе, туберкулезе, лептоспирозе.

Иммуноферментный метод также способен показать ошибочный результат при нарушенном метаболизме у пациента, наличии системных патологий, новорожденных, родившихся от инфицированных матерей. В таких случаях назначаются исследования РМП, РПГА.

Что делать больным

При выявлении у пациентов возбудителей сифилиса или антител к нему назначается курс терапии. Помимо анализов на это венерическое заболевание больной должен пройти рентгенографию, УЗИ. В обязательном порядке проводится биохимическое и общее исследования крови, мочи.

Схему лечения врач подбирает после определения срока инфицирования и стадии болезни. Сифилитический больной должен пройти курс антибиотикотерапии. При выявлении бледных трепонем назначаются препараты пенициллиновой, тетрациклиновой группы, макролиды. Высокой эффективностью в борьбе с бледной трепонемой обладают доксал, цефтриаксон, азитромицин.

При выявлении поздней формы сифилиса используются не только антибиотики, но и лекарственные средства, содержащие висмут, йод, иммуностимулирующие препараты, физиотерапевтические процедуры.

При обнаружении вторичной формы венерического заболевания у беременных назначаются курсы пенициллина. Препарат считается безопасным для плода при условии правильно подобранных дозировок. Если у женщины выявлена ранняя стадия сифилиса, терапия проводится двухкратным введением антибиотика.

Лечение вторичной формы заболевания, обнаруженного своевременно, занимает 1-1,5 месяца. В некоторых случаях терапия продолжается год и более. Поздние стадии сифилиса при отсутствии лечения приводят к серьезным осложнениям. При поражении внутренних органов и формировании мягкотканных опухолей возможна угроза жизни больного.

Правильно интерпретировать полученные результаты анализов может только врач.

При положительных значениях назначаются другие виды исследования, позволяющие поставить правильный диагноз. Своевременное обнаружение сифилиса и правильно назначенная терапия позволяют избежать грозных последствий и полностью вернуть здоровье.

Трепонемные тесты

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ). Обязательным условием является исключение перед обследованием приема больным антибиотиков, которые оказывают токсическое действие на бледные трепонемы, вызывая их неспецифическое обездвижение.

Положительные результаты РИБТ обнаруживаются примерно с середины вторичного свежего периода сифилиса, и могут длительно сохраняться после проведенного лечения. При необходимости метод используют для выявления АТ в СМЖ, это исследование отличает высокая специфичность, но низкая чувствительность (около 40 %).

РИБТ мало пригодна для диагностики ранних форм сифилиса ввиду позднего (не ранее 8–9 недель от момента заражения) появления АТ-иммобилизинов; метод может давать ложноположительные результаты, в особенности у больных с аутоиммунной патологией, злокачественными заболеваниями, диабетом. Кроме того, РИБТ – достаточно сложный, трудоемкий и дорогостоящий анализ, требующий высокой квалификации персонала и наличия вивария, в связи с чем в последние годы он используется лишь в отдельных лабораториях. В диагностике РИБТ применяется как реакция-арбитр при расхождении результатов других серологических исследований, для дифференцирования ложноположительных результатов и при установлении диагноза поздних форм сифилиса.

Реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (РСК с ТА).Чувствительность метода – около 80 %, специфичность – 98 %. Метод входил в состав комплекса стандартных серологических реакций на сифилис, регламентированного приказом Минздрава СССР № 1161 от 02.09.1985 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса». В настоящее время использование этой реакции, как и РСК с кардиолипиновым антигеном, ограничено отдельными лабораториями.

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ). Для диагностики сифилиса используют несколько модификаций РИФ: РИФ-ц – для выявления АТ в СМЖ, РИФ-200 (тестируемую сыворотку перед реакцией разводят в 200 раз); РИФ-абс (РИФ с абсорбцией), IgM-РИФ-абс (для определения АТ IgM). По чувствительности и специфичности РИФ-абс не уступает РИБТ, но выполнение этого метода намного проще. Результаты РИФ-абс становятся положительными с 3–й недели после заражения (до появления твердого шанкра или одновременно с ним), это метод ранней диагностики сифилиса. Нередки положительные результаты исследования спустя много лет после полноценного лечения раннего сифилиса, а у больных с поздним сифилисом – на протяжении десятилетий.

Показания для выполнения РИФ-абс:

  • положительные результаты НТТ у беременных при отсутствии клинических и анамнестических данных, свидетельствующих о сифилисе;
  • обследование лиц с различными соматическими и инфекционными заболеваниями, при которых отмечают положительные результаты НТТ;
  • обследование лиц с клиническими проявлениями, характерными для сифилиса, но с отрицательными результатами НТТ;
  • ранняя диагностика сифилиса;
  • в части случаев – как критерий успешности противосифилитического лечения: переход положительной РИФ-абс в отрицательную после лечения является 100% критерием излеченности сифилиса.

IgM–РИФ–абс применяют для раздельного выявления АТ классов Ig, что представляет особый интерес при диагностике врожденного сифилиса, когда АТ к трепонеме, синтезированные в организме ребенка, представлены IgM, а АТ IgG имеют материнское происхождение. Показаниями к проведению этого исследования являются: диагностика врожденного сифилиса; оценка результатов лечения раннего сифилиса.

РИФ обладает высокой чувствительностью (98,5%) и специфичностью (99,6%) практически при всех формах сифилиса. Недостатками РИФ являются: невозможность автоматизации исследования и учета результатов; трудности приготовления качественного антигена из взвеси бледных трепонем, полученных из яичка зараженного кролика; субъективизм в оценке результатов.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Сопоставление результатов, полученных при использовании РПГА и РИБТ, РИФ–абс, КСР, МРП показало высокую чувствительность и специфичность РПГА при диагностике сифилиса, совпадающую с результатами РИФ–абс.

РПГА может быть выполнена в качественном и количественном вариантах, существуют их макро- и микромодификации. Количественный метод РПГА позволяет оценить концентрацию специфических трепонемных АТ в крови. Титры от 1 : 640 и ниже характерны для пациентов, леченных по поводу сифилиса в прошлом. Более высокие титры – обычно для активной нелеченной инфекции.

Положительные результаты РПГА, как правило, отмечают спустя 3 недели после появления твердого шанкра и далее у пациентов, перенесших сифилис, в течение многих лет, нередко пожизненно.

Чувствительность РПГА составляет 76% при первичном сифилисе; 100% при вторичном сифилисе; 97% при скрытом сифилисе; 94% при позднем сифилисе. Специфичность РПГА выше, чем специфичность РИФ–абс, составляет 99%.

Благодаря соотношению высокой специфичности, чувствительности, простоты выполнения, стандартизации реагентов среди трепонемных тестов для серодиагностики сифилиса РПГА стабильно занимает лидирующее место в клинической практике в мире.

Особые преимущества ИФА заключаются: в высокой чувствительности и специфичности метода; автоматизации постановки реакции; высокой степени стандартизации; возможности исследования большого количества образцов сывороток; в количественном учете и объективной документации полученных результатов; возможности одновременного определения титра противотрепонемных АТ разных классов (IgG и IgM) в одном образце; пригодности для ранней диагностики сифилиса и диагностики врожденного сифилиса; в удобстве применения для тестирования крови в службе переливания крови; применимости в качестве подтверждающего специфического трепонемного теста. Чувствительность ИФА 98–100%, специфичность 96–100%.

К недостаткам ИФА можно отнести: непригодность для исследования единичных образцов; более длительный срок до получения результата, и меньший срок годности ИФА-наборов, например, по сравнению с РПГА.

Иммунный блот (ИБ). Одним из современных методов диагностики сифилиса является ИБ для определения АТ IgG либо IgM к определенным АГ бледной трепонемы.

Метод обладает высокой чувствительностью (до 100%,), специфичностью (98%) и воспроизводимостью (100%). Исследование дает возможность изучения спектра АТ сразу к нескольким АГ T.pallidum, применения высокоочищенных рекомбинантных и пептидных АГ, снижающих до минимума неспецифическую реактивность сывороток.

Все это определяет возможность предпочтения применения метода ИБ перед другими трепонемными тестами для верификации диагноза сифилиса в сложных случаях, в частности, для диагностики сифилиса во второй половине инкубационного периода, скрытого врожденного сифилиса в первые дни жизни ребенка, для выявления скрытого сифилиса у лиц со слабым гуморальным ответом, а также для дифференцирования ложноположительных результатов других тестов.

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Читайте также:  8 ошибок в известных вещах, которые все упустили из виду

Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 – 2020

Центральный офис: 111123, Россия, Москва, ул. Новогиреевская, д.3а, метро “Шоссе Энтузиастов”, “Перово”
+7 (495) 788-000-1, info@cmd-online.ru

! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.

Анализ на сифилис: от показаний к назначению и правил подготовки до методов исследования и стоимости

Анализ на сифилис давно стал частью рутинного медицинского обследования. Его обязательно назначают при беременности, перед госпитализацией. Результаты анализа часто требуют при приеме на работу или в ходе диспансеризации. Сегодня диагностика сифилиса находится на высоком уровне развития, но искоренить болезнь окончательно не удается — каждый год выявляют тысячи новых случаев заболевания.

Так ли страшен сифилис, как о нем говорят?

Сифилис вызывает бактерия Treponema pallidum, или бледная трепонема. Попадая в организм, она постепенно поражает все органы. Причем вне организма трепонема быстро погибает. Дезинфицирующие, моющие средства и даже обычный солнечный свет губительно воздействуют на нее. Эта бактерия может долго сохраняться только во влажных условиях и при замораживании.

Заразиться сифилисом можно только при прямом контакте с больным человеком, например при половом акте. Раньше часто диагностировались врожденные формы этого заболевания — ребенок заражался еще в утробе матери. Фиксировались случаи заражения при переливании крови от больного человека. Сейчас такого рода пути инфицирования — редкость. При беременности женщины обязательно «проходят» анализ на сифилис, а кровь перед переливанием тщательно проверяют на все инфекции.

Первый симптом сифилиса — сифилома. Уплотнение на коже, на котором появляется эрозия или язвочка. Она возникает в том месте, где трепонема проникла в организм. Чаще всего это кожа половых органов и промежности.

Через некоторое время язвочка бесследно проходит и человек часто думает, что полностью излечился. Но примерно через 1,5 месяца на коже появляется сыпь в виде розовых небольших пятен. Это стадия вторичного сифилиса, которая может длиться несколько лет.

Если и на этой стадии человек не проходит лечение, развивается третичный сифилис. Болезнь поражает все органы и ткани, появляются гуммы — плотные узлы, которые разрушаются и оставляют грубые рубцы.

Самые серьезные осложнения сифилиса — нейросифилис, поражение внутренних органов, воспаление суставов. Особенно тяжело протекает врожденный сифилис. Если во время беременности женщина переносит это заболевание, то примерно в 25% случаев ребенок погибает на 6–7 месяце беременности, еще в 14% — сразу после рождения [2] . А у выжившего младенца развиваются тяжелые поражения кожи, легких, печени и внутренних органов.

На рубеже XX–XXI веков Россия пережила вспышку сифилиса. За 2000 год было выявлено более 239 тысяч новых заболевших. После этого заболеваемость начала снижаться. В 2005 году новых заболевших было 97,9 тысяч, в 2010 — 63,7 тысяч, а в 2015 — только 34,4 тысячи. В феврале 2017 года за один месяц в России выявлено 2300 новых случаев сифилиса [3] . Но, к сожалению, как говорят специалисты, реальное количество заболевших примерно в 3–4 раза больше.

Сифилис до сих пор является распространенной болезнью в том числе и из-за проблем диагностики. Первичная сифилома не вызывает боли и самостоятельно бесследно заживает, поэтому далеко не все обращаются к врачу. Сыпь во вторичном периоде не вызывает боли, зуда и шелушения, проходит сама и не оставляет следов. В третичном периоде количество антител против этой инфекции может снижаться настолько, что не обнаруживается серологическими тестами. Есть проблемы и с обследованием половых партнеров — далеко не все готовы раскрыть врачу историю своих любовных похождений и пригласить своих партнеров на обследование.

Стоит помнить, что любые высыпания, особенно возникшие на половых органах — повод обратиться к дерматовенерологу и пройти обследование.

Когда следует сдать анализ на сифилис

Для беременных и доноров анализ на сифилис обязателен. Для некоторых работающих (госслужащие, военнослужащие, медицинские работники, повара) предоставление результатов данного исследования обязательно при поступлении на работу и затем каждый год при диспансеризации.

Анализ также сдают перед плановой операцией, при поступлении в стационар или при обращении к врачу с симптомами, характерными для этого заболевания.

Какой биоматериал исследуется

Основная часть методов диагностики предполагает анализ сыворотки крови. Из нее выделяют антитела к трепонеме и ДНК возбудителя. Сами трепонемы чаще обнаруживают в соскобах с высыпаний, которые появляются при сифилисе.

Для выявления ДНК трепонемы также могут проводить исследование мочи, эякулята, соскоба со слизистых оболочек, спинномозговой жидкости, клеток кожи или конъюнктивы глаза. То есть биоматериала из тех органов, которые могут быть поражены сифилисом.

Подготовка к исследованию

В зависимости от вида исследования кровь могут брать из вены или из пальца. Некоторые исследования желательно проводить натощак, для других достаточно не есть 4 часа до забора биоматериала.

Материал для выявления ДНК трепонемы лучше собирать до начала антибактериальной терапии. Спинномозговую жидкость забирают только в стационаре в стерильную емкость. Соскоб со слизистых оболочек, с поверхности кожи или глаза не требует особой подготовки. Его может взять врач или специалист лаборатории.

Женщинам, перед тем как сдавать анализ на сифилис из влагалища, желательно воздержаться от спринцевания, половых контактов, диагностических гинекологических манипуляций хотя бы в течение двух суток.

Методы анализа на сифилис

Исследования на сифилис разделяют на две группы — выявление трепонемы или косвенных следов ее присутствия. Для выявления возбудителя заболевания исследуют материал с язвы или из пораженных органов. Эти методы эффективны уже при первых признаках болезни.

Серологические исследования можно проводить примерно через 8–9 дней после появления первичной язвы. То есть сдавать анализ на сифилис сразу после полового контакта бесполезно.

К прямым методам относят темнопольную микроскопию, ПЦР и RIT-тест. Темнопольная микроскопия — это быстрое исследование, которое занимает один рабочий день. Его достоверность — 100%. Но при выраженном воспалении, кровоточивости, при травме элемента или после начала наружного лечения обнаружить живые трепонемы становится почти невозможно.

Микроскопия практически полностью уступила место ПЦР-диагностике. Метод ПЦР позволяет выделить участки ДНК трепонемы в соскобах с кожи и слизистых, из другого биологического материала.

Специфичность ПЦР диагностики приравнивается к 100%. Чувствительность зависит от расходных материалов, которые используются в лаборатории.

RIT-тест — это биологический метод, при котором материал от заболевшего человека прививают лабораторным кроликам. Этот метод очень точен, но сейчас используется только в исследовательских целях. Во-первых, это дорого. Во-вторых, ждать, пока у животного появятся признаки заболевания, слишком долго. Поэтому рассматривать его как реальную альтернативу другим методам диагностики нет смысла.

Непрямые методы позволяют выявить в крови признаки присутствия трепонемы — различные виды антител. Они разделяются на специфические и неспецифические.

Самым известным из неспецифических методов можно назвать реакцию РСКк или, как ее чаще называют, реакцию Вассермана, «анализ на RW». Сейчас ее постепенно вытесняет реакция микропреципитации (РМП) как более точный метод. Принцип проведения РМП достаточно простой — если в крови есть антитела, то в результате реакции выпадают белые хлопья.

РПР-тест (RPR) , или тест с быстрыми плазменными реагинами — это современный зарубежный аналог реакции микропреципитации. К этой же группе относится исследование с толуидиновым красным.

Все эти методы обладают хорошей чувствительностью, но могут давать положительные результаты при отсутствии заболевания. Поэтому если одна из этих проб оказалась положительной, проводятся подтверждающие тесты. К ним относят РСКт, РИТ, ИФА, РИФ, РПГА и иммуноблот.

ИФА и РПГА — это специфичные (100%), чувствительные (95%) и незатратные методы. Эти реакции иногда дают ложный положительный результат при воспалении и некоторых нарушениях обменных процессов. Поэтому чтобы поставить диагноз, нужны результаты минимум двух тестов.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и иммобилизации бледных трепонем (РИТ) — это специфичные, но достаточно дорогие методы. На практике они почти не используются.

Реакция связывания комплимента с трепонемным антигеном (РСКт) является более точным аналогом реакции Вассермана. В ней анализируется антиген, характерный только для бледной трепонемы.

Еще одним подтверждающим тестом является иммуноблот . Этот метод используется для углубленной диагностики в сомнительных случаях. В отличие от других анализов, которые могут быть готовы за 1–2 рабочих дня, результата иммуноблота придется ждать около недели.

Сколько стоит анализ на сифилис

Цена анализа на сифилис зависит от его вида. Скрининговые реакции, такие как РМП или RPR, обойдутся примерно в 320–380 рублей. Определение ДНК в различных субстратах от соскобов со слизистых оболочек до спинномозговой жидкости стоит около 350–450 рублей. Стоимость зависит от ценовой политики лаборатории и используемых расходных материалов. Чем более чувствителен тест, тем больше будет его цена.

ИФА анализ на сифилис стоит приблизительно 500–800 рублей в зависимости от модификации метода. За иммуноблот придется отдать около 1600–1700 рублей. Другие методы исследования практически не используются в реальной практике.

Где можно сдать биоматериал на анализы на сифилис

Кровь для исследования на сифилис можно сдать в любой поликлинике или лаборатории. Преимущество поликлиники в том, что биоматериал на анализ по направлению можно сдать бесплатно. Это актуально при обследовании перед плановой госпитализацией, при диспансеризации или если человек устраивается на работу. Минус — время ожидания, в некоторых случаях отсутствие современного оборудования и относительная открытость информации.

Если результат нужен быстро, точно и строго конфиденциально, возможно, стоит обратиться в частные лаборатории. За такой анализ придется заплатить, но при этом есть возможность выбрать метод исследования, а результат в большинстве случаев будет готов уже через 1–2 дня. Для особенно нетерпеливых есть возможность заказать экстренное проведение исследования и получить результаты уже через 2 часа.

Некоторые лаборатории проводят такие исследования на условиях анонимности: личные данные пациента не фигурируют даже в бланке направления. Результат такого анализа нельзя предъявить в больницу или работодателю, но зато можно не беспокоиться за раскрытие личных данных.

Обязательно обратите внимание на метод исследования. Вместо морально устаревшей RW желательно выбирать более современные тесты — РМП или RPR и их аналоги. При ПЦР исследовании обратите внимание на чувствительность метода, количество копий ДНК в образце, при котором тест сработает как положительный.

Сифилис — заболевание, которое может вызвать многочисленные осложнения. Но оно развивается достаточно медленно. Это значит, что у человека есть время, чтобы сдать биоматериал на анализы и пройти лечение до того, как последствия станут необратимыми.

Лабораторные методы диагностики сифилиса

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — бледная трепонема. При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

Антитела к бледной трепонеме и серологическая диагностика

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Антитела к бледной трепонеме IgM

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после лечения раннего сифилиса, через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит признаком рецидива сифилиса или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Читайте также:  8 предметов из мира спорта, которые на самом деле создали дизайнеры

Антитела к бледной трепонеме IgG

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Неспецифические антитела

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Ложноположительные анализы на сифилис

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Лабораторная диагностика сифилиса с применением серологических реакций

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

1. Нетрепонемные тесты

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

3. Тесты на сифилис с использованием рекомбинантных антигенов

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Диагностика сифилиса с применением нетрепонемных тестов

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления твердого шанкра. Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, вторичным и рецидивным сифилисом. Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с третичным активным сифилисом, в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации (МРП)

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 19. Возбудитель сифилиса при многократном увеличении.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

ПЦР на сифилис

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

Добавить комментарий